Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程之中逐渐扩展

从第一次显现出来肝肝细胞自身突变到显现出来1型号白血病外科呕吐的成效率在学童时期就有很好的揭示，多个肝肝细胞自身突变HIV的学童当中有70%在小鼠转换后10年内患上白血病，而随访15年的学童这一数目缩减到84%。相比较之下，占到外科1型号白血病一半以上的型号1型号白血病的胃癌机制还不能得到充分的科学研究。

越来越多的人开始用到分期系统来并不一定1型号白血病的成效：幼体在显现出来多种肝肝细胞自身突变时转入第1下一阶段，显现出来血糖异常时转入第2下一阶段，显现出来呕吐时转入第3下一阶段。一些多发肝肝细胞自身突变HIV的幼体，在1期和2期，成效较不够慢，并发展为胃癌的1型号白血病。我们之前揭示了一除此以外在首次侦测到多种肝肝细胞自身突变抽取后数10年无白血病的正因如此不够慢成效者，这除此以外病患人数少，但特征十分说明。随后，我们发掘出肝肝细胞自身抗体特异性CD8+T肝细胞质子化在成效缓不够慢的病患当中基本上不存在，但在近来胃癌和或多或少的白血病病患当中很容易侦测到。这可能表明，与成效病患相比较，这些病患自身免疫质子化的调节增强。

中期科学研究表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量较长时长，但白血病病患存在一些功能有缺陷，其当中都有对IL-2的质子化能力增高。此外，白血病病患当中的效应CD4+T肝细胞可能对调节不够具抵抗性，发挥为效应T肝细胞的诱发移向，自然产生的Treg和人体内产生的正向Treg，以及抗体经历的CD4+T肝细胞当中IL-2质子化移向。本科学研究的意在是揭示了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在海岸边正因如此缓不够慢成效者当中的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群相结合的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病患直系亲属当中检查和1型号白血病的脆弱因素。我们之前揭示了近十年缓不够慢成效者的特征，他们保证多重肝肝细胞自身突变HIV多达10年，但不能显现出来白血病的外科呕吐，不够慢性或非开展性自身免疫。随后，10名独自保证无白血病并希望提供大量小鼠抽取的缓不够慢成效者归入T和B肝细胞功能深入研究。在目前的科学研究当中，8名不够慢成效者(SP除此以外)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肝肝细胞自身突变HIV。所有的组织者都处于1型号白血病成效的1期，尽管一些人随后失掉了肝肝细胞自身突变对某些抗体的HIV质子化，然而，一名病患已经处于2期数6年，但不能显现出来外科呕吐，一名病患被病人为白血病，该受试者72岁，在捕获科学实验抽取时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在统计学当中对该NADPH开展了单独评估。分开外周血单个氢肝细胞(PBMCs)，采用多值流式肝细胞心法和T肝细胞诱发试验评估NADPH当中Treg的阈值、表现型号和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无监理聚类深入研究，评估Treg表现型号。

结果：与肥胖症NADPH相比较，来自不够慢成效体的心灵CD4+T肝细胞的监理聚类显示，转录的心灵CD4+ Treg阈值缩减，与糖皮质激素正向的TNFR相关蛋白(GITR)隐含缩减有关。一名HbA1c上升时的病患与成效缓不够慢者和意味着的对照除此以外相比较，Treg谱各有不同。功能深入研究表明，与肥胖症NADPH相比较，来自缓不够慢成效体的Treg介导的CD4+效应T肝细胞诱发明显损伤。发挥为对效应CD4+T肝细胞CD25和CD134隐含的诱发缩减。

所示1 集当中的表现型号深入研究显示，CD4+Treg亚型号在不够慢成效数据流当中缩减。由FlowSOM转换成的Treg一楼，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上标物隐含鉴定出10个元簇:心灵T肝细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T肝细胞;HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个不同Treg上标转换成的10个元簇的MST。每个终端代表一个战略性(100个战略性)，不够大的元战略性(10个元战略性)在终端除此以外周围上色。每个终端当中的糕点所示对此单个上标的隐含级别。(b)每个元聚类的热所示，以显示整体上标隐含。(c, d)为HD除此以外(c)和SP除此以外(d)转换成所示，以及FlowSOM辨识的每个元簇的孔洞。(e-l)相对轻元素为每个metacluster装有线或所示(轻元素> 0.05%)已确定为HD和SP除此以外:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T肝细胞(l)。深深蓝色格子代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用到CITRUS的预测号得出结论结论，Treg阈值的缩减是成效缓不够慢的标志。AO门控(a - f)和柑橘深入研究(g-k)比较SP组织者和意味着的HD组织者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差别。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的民族特色所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展分开，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(白点)和SP(黑斑)除此以外以及NADPHSP 606(深深蓝色)当中CD25+ cd127的阈值概要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装有线或所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突出的簇被辨识为SP和HD数据流间的不同。(j)装有线或所示显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)除此以外当中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对轻元素(数目)。(k)概率分布显示每个簇的表现型号(粉红色)和Treg上标相对隐含与背景隐含(深蓝色);上列，CPUTreg_3;请注意偷偷地，CPUTreg_4。背景与所有其他簇当中上标的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示3 与肥胖症献血者相比较，成效缓不够慢者心灵treg的GITR缩减。每个心灵CD4+T肝细胞元簇(心灵T肝细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T肝细胞;HLA-DR + GITR +心灵T肝细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个隐含上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的隐含热所示(sp606不都有在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)的FlowSOM GITR隐含联结，显示概率分布(c)和概要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检查和，p< 0.07(深深蓝色)所有NADPH都有，p< 0.05(深蓝色)NADPHSP 606和意味着的HD不都有在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR隐含，从AO门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)联结，显示概率分布(e)和概要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检查和

所示4 来自缓不够慢成效的CD4+ treg肝细胞控制效应CD4+T肝细胞的能力增高。SP除此以外用深蓝色的线或和格子对此，HD除此以外用金色的线或和格子对此，深深蓝色的线或/格子对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(转发者)被上标为CFSE, Treg按捕捉到的数目反应物。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培植3天后开展流式肝细胞心法侦测。(a-d)与CD4+转发者相对应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE诱发百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百份。用到HIV对照(转录的响应肝细胞不含treg)计算诱发百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效应CD4+T肝细胞对缓不够慢成效的T肝细胞再造的诱发不够敏感。SP除此以外用深蓝色的线或和格子对此，HD除此以外用金色的线或和格子对此，深深蓝色的线或/格子对此NADPHsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上标，treg按捕捉到的数目反应物。用抗CD3 /28微珠再造肝细胞，培植3天后开展流式肝细胞心法(CD25反染)和肝细胞因子深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植当中的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出结论的推论是，来自缓不够慢成效子的再造心灵CD4+Treg在GITR隐含当中得到了扩展和多样化，强调了进一步科学研究Treg在1型号白血病可能性幼体当中的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28